磁珠核酸提取的原理

发布日期:2024-08-14   浏览量:172

目前,核酸提取纯化的方法包括酚/氯仿抽提法、醇沉淀法、层析柱法、热裂解碱法、纳米磁珠法等。而其中唯一能实现自动化的方法只有纳米磁珠法。

 

磁珠法核酸提取的原理:

在磁珠法的反应体系中,核酸分子(DNA & RNA)会由线性压缩成球状,暴露出核酸骨架上大量的负电基团与反应体系中的阳离子连接,在磁珠最外层负电基团的作用下,形成“阴离子-阳离子-阴离子”的盐桥结构,使核酸分子被特异性地吸附到磁珠表面。而当反应缓冲液被弃除后,加入水性分子,会快速充分水化核酸分子,解除三者之间的离子相互作用,使吸附到磁珠上的核酸分子被纯化出来。

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图1 磁珠与核酸分子反应 (图片来源:丁香园)

 


磁珠法核酸提取的具体过程:

1.裂解:在裂解缓冲液中,破碎细胞,将核酸释放到缓冲液中;

2.结合:缓冲液中加入磁珠,充分混合使核酸吸附到磁珠表面的特异包被物质;

3.洗涤:反复清洗磁珠表面,除去原来夹带的不需要的核酸、蛋白或盐类等杂质;

4.洗脱:把磁珠转移到洗脱缓冲液中,充分混合,核酸即从磁珠表面脱落,溶入洗脱缓冲液;

5.回收:从洗脱缓冲液中去除磁珠,回收纯化的核酸。 

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图2 核酸提取过程(图片来源:丁香通)

                    

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图3 核酸提取仪的提取过程(图片来源:Thermo fisher)